摘要: 多樣品組織研磨儀對(duì)水稻研磨葉片研磨實(shí)驗(yàn)主要目的是滿足分子標(biāo)記輔助育種中基因型鑒定 、基因克隆 、測(cè)序的需要,本研究借用棉簽等具吸附功能的材料代替移液器,依次直接在2種DNA提取液中操作,建立了一種簡(jiǎn)單 、快速 、環(huán)保的水稻葉片DNA提取方法.結(jié)果表明,提取溶液通過PCR擴(kuò)增,滿足基因擴(kuò)增對(duì)模板的要求;
同時(shí),對(duì)其進(jìn)行了靈敏度測(cè)試,稀釋107倍仍然能夠擴(kuò)增出目標(biāo)片段;之后通過PCR、克隆載體連接等分子生物學(xué)手段,驗(yàn)證此方法也滿足測(cè)序的需要.本方法能夠在90s內(nèi)完成植物葉片DNA的提取,解決了目前植物基因組DNA提取方法需要離心機(jī)等昂貴特殊設(shè)備 、提取步驟繁鎖 、提取過程中刺激味大 、提取時(shí)間長(zhǎng)等問題,有利于大規(guī)模開展分子標(biāo)記輔助育種中材料基因型的鑒定,具有簡(jiǎn)單 、快速 、廉價(jià) 、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn).
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>擬測(cè)試全自動(dòng)樣品快速研磨儀對(duì)水稻葉片研磨效果
1.測(cè)試對(duì)象：上海凈信多樣品組織研磨儀，型號(hào)為JXFSTPRP-24L
2.工作原理：樣品（水稻葉片）放入離心管中，放入研磨球，通過研磨儀的高速上下振蕩帶動(dòng)研磨珠進(jìn)行粉碎樣品。
3.實(shí)驗(yàn)器材：上海凈信組織研磨儀主機(jī)，水稻葉片，不銹鋼研磨珠兩顆，提取試劑
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、首先根據(jù)研磨要求將組織研磨儀的研磨頻率及研磨時(shí)間進(jìn)行設(shè)置
二、把水稻葉片剪成小段放入凈信離心管中，加入氧化鋯珠和相應(yīng)提取試劑
三、之后把離心管放入機(jī)器適配器中，啟動(dòng)設(shè)備進(jìn)行研磨，完成樣品粉碎
實(shí)驗(yàn)效果：
研磨前后效果圖
注：多樣品組織研磨儀針對(duì)葉片的研磨時(shí)，盡可能加提取試劑，讓研磨過程中有液體的情況下使研磨效果會(huì)更加充分。
