腸道黏膜是身體重要的免疫屏障，由相關(guān)的淋巴組織和免疫細(xì)胞構(gòu)成。腸道黏膜異常被認(rèn)為與多種疾病密切相關(guān)，如炎癥性腸病、IgA 腎病等。
科學(xué)家從未停止對腸道黏膜免疫屏障的探索。腸道固有層分布著豐富的免疫細(xì)胞，他們在維持腸道免疫穩(wěn)態(tài)方面十分重要，制備相應(yīng)的單細(xì)胞懸液，對腸道固有層細(xì)胞進(jìn)行研究，對探索腸道疾病的發(fā)病機(jī)制、疾病治療的作用靶點(diǎn)以及藥物起效的作用機(jī)制具有重要意義。
單細(xì)胞懸液制備步驟
1、小腸樣品制備
采用頸椎脫位法處理小鼠后固定于手術(shù)臺，于腹部噴灑 75% 乙醇消毒，對皮膚和肌肉層進(jìn)行中線切口，暴露腸道，并從盲腸端開始截取 10 cm 小腸， 隔醫(yī)用紗布放置于冰上，小心地用眼科手術(shù)剪和鑷子去除小腸腸系膜和脂肪組織，并去除派氏結(jié)。縱向剖開小腸，PBS 緩沖液沖洗腸道內(nèi)容物直至干凈。
2、試劑配置
根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇配套的消化酶試劑盒，流式分析，原代培養(yǎng)等可選用溫和酶消化試劑盒。
3、小腸固有層單細(xì)胞懸液制備
每個(gè)樣品準(zhǔn)備好對應(yīng)的消化酶和終止液，常溫解凍。在平皿中用 PBS 緩沖液清洗腸段并用眼科手術(shù)剪剪成小塊( 約5 mm長) 。將小腸小塊收集在含有消化酶的消化管中。
將消化管放入單細(xì)胞胞懸液制備儀上，選擇對應(yīng)的腸道程序，程序結(jié)束后，儀器自動停止，然后加入終止液，離心，棄掉上清，用培養(yǎng)基重懸即可得到小腸固有層單細(xì)胞懸液。（如下圖）
采用單細(xì)胞懸液制備儀進(jìn)行，可批量制備單細(xì)胞懸液，節(jié)約了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，儀器上有人體和小鼠各個(gè)組織、器官對應(yīng)的程序，提高了單細(xì)胞懸液制備的活率和得率，使后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更加順利。
