一、實驗目的

將小鼠唾液腺組織制備成高質量單細胞懸液，為后續單細胞測序（scRNA-seq）、流式細胞分選及細胞功能研究等實驗提供合格的細胞樣本。

高效消化：專用程序5分鐘完成，減少樣本損失

高活性細胞：全程冰上操作，最大程度保護細胞活力

智能儀器：內置唾液腺專屬程序，參數精確可控護細胞活力

質量可視化：AOPI染色+細胞計數儀即時驗證結果

二、實驗步驟

1.儀器準備：連接凈信單細胞制備儀電源，打開開關，選擇唾液腺專屬程序備用。

2.試劑解凍：將消化酶提前配好（酶離者：干粉、溶解液全部混合），使試劑混合均勻，終止液用涼水解凍。

3.取材：小鼠斷頸處死后，迅速取出唾液腺，置于盛有 PBS 的培養皿中，全程放在冰上保存

4.剪碎入管：將唾液腺組織用 PBS 洗滌后，用眼科剪剪碎，放入 2 ml 消化管中，加入約 1 ml 消化酶。

5.上機運行：將消化管放到儀器模塊上，選擇對應的唾液腺程序，點擊運行開始消化。

6.消化完成：約 5 分鐘后消化完成，停止運行，立即取出消化管。

7.過濾&終止：用 70 μm 濾網過濾細胞液，按 1:1 比例加入終止液終止消化，防止過度消化損傷細胞。

8.離心 & 去碎片：過濾后的懸液離心重懸，棄上清；加入 2 ml 裂紅溶液（含 200 μl FBS），冰上裂紅 3-5 min；再加入 500 μl PBS + 1 ml 碎片去除劑，離心棄上清，洗細胞兩次，有效去除紅細胞及細胞碎片。

9.重懸得樣：最后加入少量無菌 PBS，充分吹打混勻底部沉淀，即可獲得高質量單細胞懸液，準備進行后續實驗。

10.質控計數：取少量細胞懸液進行 AOPI 染色，使用細胞計數儀檢測細胞濃度與活率，直觀評估樣本質量。

三、細胞技術儀檢測數據

通過凈信單細胞制備系統制備的小鼠唾液腺單細胞懸液，經 AOPI 染色后在細胞計數儀下觀察，可獲得分散均勻、形態完整的單細胞群體，細胞活率高，碎片率低，充分滿足單細胞測序上機要求。

四、注意事項

1、酶離者試劑盒溶解后，必須在?20°C低溫保存；使用前用涼水緩慢解凍，切勿使用溫熱水，避免酶活性喪失。

2、全程保持冰上操作，取材后應盡快處理組織，減少細胞活性損失。

3、洗滌步驟不宜次數過多或時間過長，否則會造成細胞機械損失，影響最終產量和活率。

4、過濾時動作輕柔，避免對濾網施加過大壓力，以保留更多完整細胞。

五、總結

唾液腺含有豐富的腺泡細胞、導管細胞及免疫細胞，是研究腺體發育與疾病的重要模型。凈信單細胞制備系統憑借預置的唾液腺專屬消化程序，結合經過優化的酶學配方，實現了從取材到單細胞懸液的全流程標準化操作，有效降低了批次間差異，讓每一次實驗都能穩定可靠。

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